(1)第一階段試管菌種培育:準備850-900毫升清水、100-150毫升新鮮山楂果汁、玉竹粉20-30克、玉米粉20-30克、葡萄糖20-30克、瓊脂粉15-20克,將上述各種物料一并放入加熱容器中,然后加熱至各種物料完全溶解于水中得基質液,將基質液的ph調到7.5-8.5后分裝于試管中,接著滅菌、擺斜面得斜面試管,在無菌環境下將蛹蟲草菌種接入斜面試管中,并在15-20度及暗光環境下培養至蟲草菌絲長滿管,再將長滿蟲草菌絲的試管放置于在20-25度及見光環境下培養至蟲草菌絲轉成桔黃色得第一階段試管菌種;
(2)第一階段液體菌種培育:準備750-800毫升清水、200-250毫升新鮮山楂果汁、玉竹粉50-60克、葡萄糖20-30克、蛋白胨5-6克,將上述各種物料一并放入加熱容器中,然后加熱至各種物料完全溶解于水中得營養液,將營養液的ph調到6.5-7.5后分裝于液體菌種培養容器中并滅菌得到液體菌種培養基,在無菌環境下將步驟(1)中培養而得的第一階段試管菌種接到液體菌種培養基中,最后在15-20度及暗光環境下通過深層發酵培養至液體菌種培養基長滿菌球或菌絲得第一階段液體菌種;
(3)第一階段子實體培育:準備650-700毫升清水、300-350毫升新鮮山楂果汁、玉竹粉50-60克、葡萄糖20-30克、蛋白胨5-6克,將上述各種物料一并放入加熱容器中,然后加熱至各種物料完全溶解于水中得營養液,并將營養液的ph調到6-7備用;取糯米50-70份、山楂果渣15-20份、山楂枝葉粉碎物10-25份、蠶蛹粉3-5份,將糯米、山楂果渣、山楂枝葉粉碎物、蠶蛹粉混合起來得混合物料,再把營養液拌入混合物料中,把混合物料的含水量調整到55-60%得培養基質,把培養基質分裝到培養容器中并滅菌,在無菌環境下將步驟(2)中培育得到的第一階段液體菌種接到培養基質中,并將接好種的培養基質放置在溫度是15-20度、濕度是70-75%及暗光環境下培養至蟲草菌絲長滿培養料,接著將長滿蟲草菌絲的培養基質放置于在溫度是20-25度、濕度是80-90%及見光環境下培養至蟲草菌絲轉成桔黃色,最后在溫度是20-25度、濕度是80-90%及見光環境下培養至蟲草子實體長成;
(4)第二階段試管菌種培育:550-600毫升清水、400-450毫升新鮮山楂果汁、玉竹粉20-30克、葡萄糖20-30克、磷酸二氫鉀2-3克、硫酸鎂1-2克、蛋白胨5-6克、瓊脂粉15-20克,將上述各種物料一并放入加熱容器中,然后加熱至各種物料完全溶解于水中得基質液,將基質液的ph調到5.5-6后分裝于試管中,接著滅菌、擺斜面得斜面試管,在無菌環境下將步驟(3)中培育得到的第一階段蛹蟲草子實體分離到斜面試管中,并在15-20度及暗光環境下培養至蟲草菌絲長滿管,再將長滿蟲草菌絲的試管放置于在20-25度及見光環境下培養至蟲草菌絲轉成桔黃色得第二階段試管菌種;
(5)第二階段液體菌種培育:450-500毫升清水、500-550毫升新鮮山楂果汁、玉竹粉50-60克、葡萄糖20-30克、蛋白胨5-6克,將上述各種物料一并放入加熱容器中,然后加熱至各種物料完全溶解于水中得營養液,將營養液的ph調到5-5.5后分裝于液體菌種培養容器中并滅菌得液體菌種培養基,在無菌環境下將步驟(4)中培養而得的第二階段試管菌種接到液體菌種培養基中,最后在15-20度及暗光環境下通過深層發酵培養至液體菌種培養基長滿菌球或菌絲得第二階段液體菌種;
(6)第二階段子實體培育:350-400毫升清水、600-650毫升新鮮山楂果汁、玉竹粉50-60克、葡萄糖20-30克、蛋白胨5-6克,將上述各種物料一并放入加熱容器中,然后加熱至各種物料完全溶解于水中得營養液,并將營養液的ph調到4.5-5備用;取山楂果渣50-70份、山楂枝葉粉碎物20-25份、糯米10-20份、蠶蛹粉3-5份,將山楂果渣、山楂枝葉粉碎物、糯米、蠶蛹粉混合起來得混合物料,再把營養液拌入混合物料中,把混合物料的含水量調整到55-60%得培養基質,把培養基質分裝到培養容器中并滅菌,在無菌環境下將步驟(5)中培育得到的第二階段液體菌種接到培養基質中,并將接好種的培養基質放置在溫度是15-20度、濕度是70-75%及暗光環境下培養至蟲草菌絲長滿培養料,接著將長滿蟲草菌絲的培養基質放置于在溫度是20-25度、濕度是80-90%及見光環境下培養至蟲草菌絲轉成桔黃色,最后在溫度是20-25度、濕度是80-90%及見光環境下培養至蟲草子實體長成;
(7)第三階段試管菌種培育:650-700毫升新鮮山楂果汁、300-350毫升清水、玉竹粉20-30克、葡萄糖20-30克、磷酸二氫鉀2-3克、硫酸鎂1-2克、蛋白胨5-6克、瓊脂粉15-20克,將上述各種物料一并放入加熱容器中,然后加熱至各種物料完全溶解于水中得基質液,接著將基質液分裝于試管中,并將試管進行滅菌、擺斜面得斜面試管,在無菌環境下將步驟(6)中培育得到的第二階段蛹蟲草子實體分離到斜面試管中,并在15-20度及暗光環境下培養至蟲草菌絲長滿管,再將長滿蟲草菌絲的試管放置于在20-25度及見光環境下培養至蟲草菌絲轉成桔黃色得第三階段試管菌種。
2.根據權利要求1中所述的一種以山楂為基質培育蟲草菌種的方法,其特征在于步驟(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)和(7)中所述的山楂果汁制備方法如下:
3.根據權利要求1中所述的一種以山楂為基質培育蟲草菌種的方法,其特征在于步驟(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)和(7)中所述的玉竹粉制備方法如下:
4.根據權利要求1中所述的一種以山楂為基質培育蟲草菌種的方法,其特征在于步驟(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)和(7)中所述的滅菌方法如下:
(1)高壓滅菌:在壓力滅菌容器內、在121度、0.15個兆帕下滅菌30-50分鐘;
5.根據權利要求1中所述的一種以山楂為基質培育蟲草菌種的方法,其特征在于:步驟(1)中所述的蛹蟲草菌種為市售的蛹蟲草試管菌種。
6.根據權利要求1中所述的一種以山楂為基質培育蟲草菌種的方法,其特征在于步驟(3)和步驟(6)中所述的山楂枝葉粉碎物制備方法如下:
7.根據權利要求1中所述的一種以山楂為基質培育蟲草菌種的方法,其特征在于:步驟(3)和步驟(6)中所述的山楂果渣是步驟(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)和(7)中制備山楂果汁時得到的山楂果渣。
8.根據權利要求1中所述的一種以山楂為基質培育蟲草菌種的方法,其特征在于步驟(1)、(3)、(4)、(6)和(7)中所述的見光培養是給予100-600lux光照。
一種以山楂為基質培育蟲草菌種的方法,是以山楂果和山楂枝葉為主要原料,以市售的蛹蟲草菌種為菌源,將蟲草菌種經過多個階段的馴化培育,培育出適合在山楂基質良好生長的蟲草菌種。通過實施本發明,用山楂、玉竹粉和玉米粉組成營養豐富、全面的培基質,蟲草菌絲在這樣的營養滋養下生長迅猛、菌絲粗壯,蟲草子實體個體也生長粗壯,生物轉化率高。通過實施本發明,將蟲草試管菌種、蟲草液體菌種、培育蟲草子實體的工序上進行幾個階段的培訓馴化,主要是從培養基質中的山楂內含物逐量增加和PH逐步降低來進行馴化,讓蟲草菌絲從逐步適應到完全適應在山楂培養基生長,最終讓山楂培養基質中長出高品質、高產量的蟲草子實體。
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