冬蟲夏草是一種極其珍貴的藥食兩用真菌,在真菌學(xué)上分類為子囊菌綱、肉座菌目、麥角菌科、草蟲屬。野生冬蟲夏草均寄生在鱗翅目昆蟲體內(nèi),且對生長環(huán)境要求較高,所以其產(chǎn)量受到極大限制。隨著社會的發(fā)展和人們生活水平的提高,特別是對冬蟲夏草醫(yī)藥作用的進(jìn)一步挖掘,它的需求量越來越大,僅靠采集野生冬蟲夏草遠(yuǎn)不能滿足社會的需要。目前,人工培育的報(bào)道很少,僅是在實(shí)驗(yàn)室試管條件下,或是采用發(fā)酵方法生產(chǎn)冬蟲夏草菌絲的方法。如CN1197843A公開的“中國冬蟲夏草真菌的發(fā)酵生產(chǎn)方法”,就是采用液體培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn),其產(chǎn)品無子實(shí)體。
本發(fā)明的目的是用人工模擬其生長條件的方法,來培育冬蟲夏草子實(shí)體,以提高產(chǎn)量,滿足人們的需要。
本發(fā)明采用的培養(yǎng)基原料為大米、玉米、谷糠、蠶蛹粉及由水、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、檸檬酸三銨、維生素B1配制而成的營養(yǎng)液。營養(yǎng)液的配方是每1000毫升水中加葡萄糖10克、蛋白胨5克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂1克、檸檬酸三銨1克、維生素B110毫克。培養(yǎng)基原料組分重量配比為大米20-25%、玉米10-15%、谷糠4-8%、蠶蛹粉1-2%、營養(yǎng)液50-55%。
本發(fā)明的培育方法(步驟)1、培養(yǎng)基的制作。在容器中按上述比例加入大米、玉米、谷糠、蠶蛹粉及營養(yǎng)液,容器封口,用常規(guī)方法滅菌后冷卻備用。
3、養(yǎng)菌。將接入菌的容器置于12-17攝氏度的避光環(huán)境下培養(yǎng)20-25天,直至白色菌絲長滿培養(yǎng)基2/3以上。
4、轉(zhuǎn)色。在200勒克斯以上的光照條件下繼續(xù)培養(yǎng)10天左右,菌絲由白色轉(zhuǎn)為黃色。
5、刺激子實(shí)體原基的產(chǎn)生。轉(zhuǎn)色后在晝夜溫差10攝氏度以上的條件下予以刺激10天,培養(yǎng)基表面產(chǎn)生大量子實(shí)體原基。晝夜溫差范圍5-25攝氏度,同時(shí)在封口處穿孔,使培養(yǎng)空間適度通風(fēng),以供給充足的氧氣。
6、子實(shí)體生長。在18-25攝氏度、相對濕度85-90%的條件下,穩(wěn)定培養(yǎng)20-25天,子實(shí)體長滿容器,長度達(dá)6-7cm。
7、摘收。打開封口,用帶彎頭的小鐵鏟將子實(shí)體從根部輕輕鏟下,置于陰涼處涼干或烘干。
本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)及積極效果1、人工培育的冬蟲夏草經(jīng)中國綠色食品學(xué)會檢驗(yàn),與天然冬蟲夏草的化學(xué)成分基本相同;氨基酸種類完全相同,其含量大部分比天然冬蟲草高出一倍。具體成分見附表1。
無機(jī)元素 在測定的26種無機(jī)元素中有15種元素與天然冬蟲草相同,含量甚微;其余11種元素的含量較高,具體含量列入附表2。其中Ca、Al、Si、Zn、Cr略高于天然冬蟲夏草,Ti、Cu略低于天然冬蟲夏草,F(xiàn)e比天然冬蟲夏蟲低270ppm,Mn低45ppm,重金屬含量不超過15ppm。
核苷 人工與天然冬蟲夏草的核苷類化合物含量比較接近,但人工蟲草多含腺苷。具體含量列入附表3。
麥角甾醇和D-甘露醇。送檢樣品的麥角甾醇含量比天然蟲草高出一倍,分別為0.15%和0.069%;D-甘露醇含量則比天然蟲草低30%,分別為5.5%和8.1%。
維生素核黃素含量基本相同,為1.25mg/100g;硫胺素含量比天然蟲草高得多,分別為0.34mg/100g和0.018mg/100g;β-類葫蘿卜素含量為0.76mg/100g,而天然蟲草中未檢出;維生素C含量大大低于天然蟲草,分別為4mg/100g和23.1mg/100g。
選用美國小白鼠進(jìn)行動物試驗(yàn),分為三組I空白、II人工蟲草、III天然蟲草。以一定劑量連續(xù)分別喂養(yǎng)45天,對其12項(xiàng)生理指標(biāo)測試,結(jié)果表明II、III組明顯優(yōu)于I組,II、III組之間無明顯差異。證明人工冬蟲夏草在藥理藥效上與天然冬蟲夏草基本一樣,屬藥食兩用高級滋補(bǔ)品。
3、人工培育冬蟲夏草的方法具有較高的產(chǎn)量,采用室內(nèi)立體培育,單位平方米每周可采150-200g,具有較好的經(jīng)濟(jì)效益。
4、本發(fā)明可極大地滿足人們?nèi)找嬖龃蟮膶Χx夏草的需求,保護(hù)野生冬蟲夏草資源,具有較大的社會效益。
實(shí)施例1培養(yǎng)基為大米20%、玉米10%、谷糠4%、蠶蛹粉1%、營養(yǎng)液50%。其中營養(yǎng)液的配方為1000毫升水中加葡萄糖10克、蛋白胨5克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂1克、檸檬酸三胺1克、維生素B110毫克。培育步驟1、將上述培養(yǎng)基裝入容器中,用聚丙烯塑料膜封口,置于0.1Mpa、120攝氏度下滅菌1.5小時(shí)后冷卻備用;2、將冬蟲夏草菌接入培養(yǎng)基中(在無菌條件下操作);3、將接入菌種的容器置于12攝氏度的避光環(huán)境下培養(yǎng)20天,生長菌絲;4、在200勒克斯以上的光照條件下培養(yǎng)10天轉(zhuǎn)色;5、將轉(zhuǎn)色后的菌絲體在晝夜溫差10攝氏度以上(白天5攝氏度,夜晚15攝氏度)的條件下刺激10天,并用牙簽在封口處穿孔通風(fēng),產(chǎn)生大量的子實(shí)體原基;6、在18攝氏度、85%的相對濕度良好通風(fēng)條件下,穩(wěn)定培養(yǎng)20天,子實(shí)體長滿容器(達(dá)6-7cm長);7、打開封口,摘收子實(shí)體。
實(shí)施例2培養(yǎng)基為大米25%、玉米15%、谷糠8%、蠶蛹粉2%、營養(yǎng)液55%。其中營養(yǎng)液的配方同例1。培育步驟1、制備培養(yǎng)基(同例1),2、接種(同例1),3、養(yǎng)菌環(huán)境溫度17攝氏度,避光培養(yǎng)25天,4、轉(zhuǎn)色(同例1),5、刺激子實(shí)體原基產(chǎn)生。晝夜溫差10攝氏度(白天15攝氏度,夜晚25攝氏度)刺激10天,其余同例1,6、子實(shí)體生長在溫度25攝氏度,相對濕度90%通風(fēng)條件下培養(yǎng)25天,7、摘收子實(shí)體。
1.一種人工培育冬蟲夏草的方法,其特征在于首先將菌種接入以大米、玉米、谷糠、蠶蛹粉及由水、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、檸檬酸三胺、維生素B1配成的營養(yǎng)液的培養(yǎng)基中,然后將接入冬蟲夏草菌的容器置于12-17攝氏度的避光環(huán)境下,培養(yǎng)20-25天,生出白色菌絲,再在光照條件下繼續(xù)培養(yǎng)10天,菌絲體由白色轉(zhuǎn)為黃色,轉(zhuǎn)色后在晝夜溫差10攝氏度的條件下刺激10天,產(chǎn)生子實(shí)體原基,在溫度18-25攝氏度,相對濕度85-90%的條件下,穩(wěn)定培養(yǎng)20-25天,子實(shí)體長大、摘收;培養(yǎng)基的組分重量配比為大米20-25%、玉米10-15%、谷糠4-8%、蠶蛹粉1-2%、營養(yǎng)液50-55%,其中營養(yǎng)液的配方為每1000毫升水中加葡萄糖10克、蛋白胨5克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂1克、檸檬酸三胺1克、維生素B110毫克。
2.按照權(quán)利要求1所述的人工培育冬蟲夏草的方法,其特征在于所述的光照條件大于200勒克斯。
3.按照權(quán)利要求1所述的人工培育冬蟲夏草的方法,其特征在于所述的刺激子實(shí)體原基產(chǎn)生的條件,晝夜溫差應(yīng)在5-25攝氏度范圍內(nèi),并在容器封口處穿孔通風(fēng)。
4.按照權(quán)利要求1所述的人工培育冬蟲夏草的方法,其特征在于所述的培養(yǎng)基的最佳組分重量配比為大米25%、玉米13%、谷糠6%、蠶蛹粉1%、營養(yǎng)液55%。
本發(fā)明涉及一種人工培育冬蟲夏草的方法,首先將菌種接入以大米、玉米、谷糠、蠶蛹粉及由水、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、檸檬酸三胺、維生素B
發(fā)明者高平, 劉寶琦, 于艷琴, 冉翠香, 王莉, 李紅衛(wèi) 申請人:車振明
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